Eines Tages jedoch wurde er von den Erscheinungen schöner Frauen versucht, ihn dazu zu verleiten, sein Keuschheitsgelübde zu brechen. Der heilige Antonius verschreckte die Frauen schließlich, indem er seine eigene Zunge abbiss und sie auf sie spuckte. Schon immer von den farbenfroheren Aspekten der christlichen Tradition angezogen, malte Hieronymus Bosch die Versuchung des heiligen Antonius in seinem charakteristischen komplizierten und exzentrischen Stil. Gemalt 1500-1525 und noch einmal in mehreren anderen Versionen bis 1530. Es gibt auch ein Triptychon Versuchung des heiligen Antonius von 1490 (ein Gemälde , das auf drei Tafeln ausgeführt ist, die durch ein Scharnier miteinander verbunden sind). Diese Version befindet sich im Nationalmuseum für antike Kunst in Lissabon. Das Gemälde befindet sich im Prado-Museum in Madrid, und nach Zweifeln, ob es wirklich von Hieronymus Bosch stammt, untersuchte das Museum diese Behauptung mit wissenschaftlichen Tests. Die Tests, so das Prado-Museum, zeigten, dass das Werk tatsächlich von Hieronymus Bosch gemalt wurde.

Charakteristisch für das Werk des Künstlers ist die Darstellung des heiligen Antonius von Hieronymus Bosch. Die exzentrischen Figuren, die die Seite verstreuen, wo Teile der menschlichen Gestalt mit Maschinen und Tierkörpern verschmolzen sind, finden sich auch in anderen berühmten Werken von Bosch, wie seinen Darstellungen des Garten Eden und der Hölle. Man könnte argumentieren, dass diese Figuren die seltsamen und wunderbaren Figuren widerspiegeln, die in Manuskripten des späten Mittelalters und der Renaissance zu finden sind. Wie oben erwähnt, hat Hieronymus Bosch mehrere Versionen der Versuchung des heiligen Antonius gemalt, aber alle haben Ähnlichkeiten. Zum Beispiel neigen sie dazu, den Heiligen – oder einen Aspekt seiner Psyche – als einen riesigen Fisch darzustellen, der in ein scharlachrotes Gewand gehüllt ist. Was dies darstellt, mag umstritten sein, aber es gibt bemerkenswerte Ähnlichkeiten zwischen dieser Darstellung und Boschs Darstellung des Heiligen Johannes des Täufers in seinem Gemälde „Johannes der Täufer in der Wildnis“. In diesem letztgenannten Gemälde wird Johannes der Täufer auf seinem Bauch liegend dargestellt, in ein scharlachrotes Gewand gehüllt, ähnlich wie die Fische, die in Die Versuchung des Heiligen Antonius erscheinen.