Sin embargo, un día fue tentado por las apariciones de hermosas mujeres que intentaron inducirlo a romper su voto de castidad. San Antonio finalmente asustó a las mujeres mordiéndose la lengua y escupiéndola. Atraído siempre por los aspectos más coloridos de la tradición cristiana, Hieronymus Bosch pintó la tentación de San Antonio con su característico estilo intrincado y excéntrico. Pintado en 1500-1525, y de nuevo en varias otras versiones hasta 1530. También hay un tríptico de las Tentaciones de San Antonio de 1490 ( pintura que está ejecutada en tres paneles unidos entre sí por una bisagra). Esa versión se encuentra en el Museo Nacional de Arte Antiguo de Lisboa. La pintura se encuentra en el museo del Prado de Madrid y, tras las dudas sobre si realmente era de Hieronymus Bosch, el museo utilizó pruebas científicas para investigar esta afirmación. Las pruebas, afirmó el Museo del Prado, demostraron que la obra fue efectivamente pintada por Hieronymus Bosch.

La representación de San Antonio de Hieronymus Bosch es característica de la obra de este artista. Por ejemplo, las figuras excéntricas que ensucian la página, donde partes de la forma humana se fusionan con máquinas y cuerpos animales, también están presentes en otras obras famosas de El Bosco, como sus representaciones del Jardín del Edén y del infierno. Se podría argumentar que estas figuras hacen eco de las figuras extrañas y maravillosas que se pueden encontrar en los manuscritos de la era medieval tardía y el Renacimiento. Como se mencionó anteriormente, Hieronymus Bosch pintó varias versiones de la tentación de San Antonio, sin embargo, todas tienen similitudes. Por ejemplo, tienden a representar al santo, o algún aspecto de su psique, como un enorme pez envuelto en una túnica escarlata. Lo que esto representa puede estar sujeto a debate, sin embargo, existen sorprendentes similitudes entre esto y la representación de San Juan Bautista de Bosch en su pintura 'Juan el Bautista en el desierto'. En este último cuadro, se representa a Juan Bautista recostado sobre su estómago envuelto en una túnica escarlata, de forma similar a los peces que aparecen en La tentación de San Antonio.